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        離心機---差速離心簡介
        瀏覽次數:1275發布日期:2019-08-09

              差速離心

            差速離心法是利用樣品中各種組分的沉降系數不同而進行分離的方法,又稱差分離心或差級離心。通常兩個組分的沉降系數差在10倍以上時可以用此法分離。在差速離心中細胞器沉降的順序依次為:核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內質網與高基體、之后為核蛋白體。

             差速離心是指低速與高速離心交替進行,使各種沉降系數不同的顆粒先后沉淀下來,達到分離的目的。沉降系數差別在一個或幾個數量級的顆粒,可以用此法分離。樣品離心時,在同一離心條件下,沉降速度不同,通過不斷增加相對離心力,使一個非均勻混合液內的大小、形狀不同的粒子分部沉淀。操作過程中一般是在離心后用傾倒的辦法把上清液與沉淀分開,然后將上清液加高轉速離心,分離出第二部分沉淀,如此往復加高轉速,逐級分離出所需要的物質。差速離心方法較簡單,但分辨率不高,沉淀系數在同一個數量級內的各種粒子不容易分開,常用于其他分離手段之前的粗制品提取。

            在差速離心中細胞器沉降的順序依次為:核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內質網與高基體、之后為核蛋白體。由于各種細胞器在大小和密度上相互重疊,而且某些慢沉降顆粒常常被快沉降顆粒裹到沉淀塊中,一般重復23次效果會好一些。差速離心只用于分離大小懸殊的細胞,更多用于分離細胞器。通過差速離心可將細胞器初步分離,常需進一步通過密度梯離心再行分離純化。

        差速離心 - 優點

            差速離心法的優點是樣品的處理量較大,可用于大量樣品的初分離。其缺點是分離復雜樣品和要求分離純度較高時,離心次數多,操作繁雜。由于沉淀的多次清洗、溶解、再沉淀,容易引起中間損失,所以離心分辨力差。實際分離時由于離心時的對流、擴散和收取沉淀時的污染,對于一些沉降系數相差不大的組分無法進行完全的分離提純。產品的純度和回收率都達不到上述理論值。因此差速離心法主要用于大量樣品的初步分離提純。

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